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鸭极低密度脂蛋白(VLDL)酶联免疫elisa分析试剂盒的间接法

点击次数:34 发布时间:2020-12-22

检测未知抗体的间接法:
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。
 
2.次日洗涤3次。
 
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,一遍用DDW洗涤。
 
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
 
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

竞争法的简要操作步骤:
1)先加入特异性抗原,使抗原固定结合于载体表面;
2)加入梯度浓度比例的待测样品与酶标抗体混合物,并做只加酶标抗体的对照组;
3)加入酶促反应底物,发生显色反应,对比实验组及对照组的显色差异,计算未知抗体的量。

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